沉积法-病毒提纯办法

沉积法-病毒提纯办法

来源:江南游戏官方网站/鱼蛋白肥    发布时间:2023-10-13 12:42:01

主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒,有中性盐沉积法、聚乙二醇(PEG)沉积法、有机溶剂沉积 法、等电点沉积法、皂土法和鱼精蛋白沉积法等。1.中性盐沉积法病毒一般在45%以上饱满度的硫酸铵溶液中沉积,

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  主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒,有中性盐沉积法、聚乙二醇(PEG)沉积法、有机溶剂沉积 法、等电点沉积法、皂土法和鱼精蛋白沉积法等。1.中性盐沉积法病毒一般在45%以上饱满度的硫酸铵溶液中沉积,且坚持其感染性。在含有病毒的安排培养液中参加等体积的饱满硫酸铵,可以很容易地沉积某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。2.聚乙二醇沉积法聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物,具有各种不同的分子量,用于病毒沉积的主 要是分子量为2 000~6 000的PEG。将PEG配成50%左右的溶液,或直接将固体PEG加于病毒悬液中,使其到达所需浓度,通常在4℃拌和过夜,然后离心使病毒沉积。Tanncock(1985年) 成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。3.有机溶剂沉积法甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒,但、氯仿等脂溶剂关于具有脂质囊膜的病毒具有损坏和灭活效果,故不适于这类病毒的浓缩提纯。4.等电点沉积法病毒粒子在等电点时,所带着的正电荷与负电荷彼此中和,因而失掉彼此排挤的效果而产生沉积。大都病毒的等电点在pH4.5~5.5之间,因而在pH3~6规模内均可沉积,因为一部分细胞成份在等电点时亦产生沉积,此法效果不太抱负,但从感染的安排培养液中浓缩病毒,可以得到较好成果。使用酸性规模的等电点沉积或分级沉积病毒时,必定要注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与安排蛋白电荷的差异。5.皂土法Girin(1989年)使用皂土在酸性条件下(pH4~45)吸附轮状病毒SA11,再在碱性条 件下(pH85),又使其洗脱下来,从而到达纯化意图。6.鱼精蛋白沉积法鱼精蛋白为碱性蛋白,具有带着其它蛋白质共沉积的效果,能和直径大于50nm的病毒 一起沉积而不影响病毒的感染力。当向这种沉积物参加1mol/L NaCl时,病毒又从头释放到悬液中,而鱼精蛋白依然沉积。直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白一起沉积。因而, 可利用鱼精蛋白去除病毒资料中直径大于50nm的异种蛋白质。

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