过程3. 2个50 mL烧杯,一个放生理盐水用于清洗匀浆器头;另一个放冰用于放盛有安排的EP管。每次匀浆2s(或许5-8s)
用RIPA(或PBS)稀释规范品(如下):取10 μL规范品稀释至100 μL每份,通常用两份。
BCA试剂盒A液:B液=50:1;每孔需加工作液200 μL,由此核算总体积。
每孔参加4 μL(2 μL时为10倍稀释)蛋白样品,每孔用16 μL RIPA(或PBS)弥补至20 μL(5倍稀释蛋白样品,避免蛋白浓度过高,超越监测上限,因而最终得到的蛋白浓度应×5),再参加200 μL工作液。
过程3. 新建→检测→输入检测波长(依据不同试剂盒波长不同,碧云天为562nm)→确认。
运用PCR仪煮蛋白,详见视频。煮好的蛋白马上放入-80℃冰箱保存。蛋白+上样缓冲液(缓冲液>1×运用),95-100℃煮5-10min。冰上马上降温5min。