倒掉培育液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培育液（或将瓶直立放置一瞬间使剩余培育液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。

  每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH=7.2～7.3）。平放悄悄摇摆1min洗刷细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培育液。将PBS弃净后把培育瓶置于冰上。

  按1ml裂解液加10μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。）

  每瓶细胞加400μl含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充沛裂解培育瓶要常常来回摇摆。

  裂解完后，用洁净的刮棒将细胞刮于培育瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。

  将少数安排块置于1～2ml匀浆器中球状部位，用洁净的剪刀将安排块尽量剪碎。

  加400μl单去污剂裂解液裂（含PMSF）于匀浆器中，进行匀浆。然后置于冰上。

  裂解30min后，即可用移液器将裂解液移至1.5ml离心管中，然后在4℃下12000 rpm离心5min，取上清分装于0.5ml离心管中并置于-20℃保存。

  因为受药物的影响，一些细胞脱落下来，所以除按1）操作外还应搜集培育液中的细胞。

  弃上清，参加4ml PBS并用枪悄悄吹打洗刷，然后2500 rpm离心5min。弃上清后用PBS重复洗刷一次。

  用枪洗干上清后，加100μl裂解液（含PMSF）冰上裂解30min，裂解过程中要常常弹一弹以使细胞充沛裂解。

  将裂解液与培育瓶中裂解液混在一同4℃、12000 rpm离心5min，取上清分装于0.5ml离心管中并置于-20℃保存。

  Aprotinin可以用cocktail替代,并且只需白的时分能不加

  或许用三氯醋酸—丙酮沉积法，这种办法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特色！当然单向电泳也相同适用，仅仅电泳的条带会削减！

  参加样品体积3 倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1 小时）弃上清。

  参加等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空枯燥沉积，备用。

  上样前参加裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充沛溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1 小时或更长时刻以没有沉积为规范），可暂时保存在4℃待用。

  存在的问题：参加1％SDS 后沉积不溶解，仍是很大的一块，4 度离心后又多了白色沉积，SDS 结晶？测浓度，含量才1mg/ml 左右。

  处理：提蛋白试剂盒，别的安排巨细适中，要碎，当即加2X BUFFER，然后煮5－10 分钟，作用很好的。

  用甲醇提取的，冻干后用缓冲液溶解的。样品缓冲液是一般的。其间含又2%的SDS，20mmol 的2-巯基乙醇。

  0-4°C 生理盐水冲刷安排外表血迹，以1：9（即100ug 分量参加900ul 体积）的份额参加蛋白匀浆提取液，0-4 °C 冰水混合物顶用1ml 匀浆器制成10%的蛋白匀浆。匀浆在10000G 离心10-15 分钟，取上清备用。

  将切取的安排用4℃预冷的0.01mol/l 的PBS 漂洗去血渍，再用滤纸吸干残留的PBS，将安排称重，将0.1G 安排放入1ml 的玻璃匀浆器，参加800l 裂解液在冰上充沛匀浆，将得到的匀浆液用液氮重复冻融3 次，室温静置30mins，4℃

  15000r/min 离心1h，当心避开脂层，汲取上清，分装，-80℃保存。