运用透析袋浓缩蛋白质溶液是运用最广的一种。即将浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸替代），结扎，把高分子（6000－12000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%－40%浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用往后，可放入温箱中烘干或天然枯燥后，仍可再用。

  这是浓缩蛋白质的一种较好的方法，它既使蛋白质不易变性，又坚持蛋白质中固有的成分。它是在冰冻状况下直接提高去除水分。具体做法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置枯燥器内（枯燥器内装有枯燥剂，如NaOH、CaCl2和硅胶等）。密闭，敏捷抽暇，并维持在抽暇状况。数小时后就能够取得含有蛋白的枯燥粉末。枯燥后的蛋白质保存便利，运用时可配成恣意浓度运用。也可采用冻干机进行冷冻枯燥。

  将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。此法简略，但速度慢，且温度不能过高，主张仍是不要超越15℃。

  此法是运用微孔纤维素膜经过高压将水分滤出，而蛋白质存留于膜上到达浓缩意图。有两种方法来进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内，在不断拌和之下过滤；另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空枯燥器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。

  首要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性，不过得有浓缩器，不是哪个试验室都有的。

  选用孔径较小的凝胶，如SephadexG25或G50，将凝胶直接参加蛋白溶液中。依据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，经过离心除掉。

  浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水功能。每克干胶可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适合浓缩10000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后，蛋白质的回收率可达80%～90%。比凝胶运用便利，直接参加被浓缩的溶液中即可。必定要留意，浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在浓缩胶外表发生阳离子交流，影响浓缩物质的回收率。

  经过免疫沉积法，用蛋白质特异功能够定量能够别离意图蛋白。有三个进程组成：首先将特异性抗体参加细胞提取物，第二步参加经化学固定的金黄色葡萄球菌，以保证构成很多沉积。这些细菌经过蛋白质A和抗体构成复合物，蛋白质A与免疫球蛋白的Fc部分有高度的亲和性。或者说，纯化的蛋白A结合Sephrarose树脂，为从细胞提取物中别离出抗原抗体复合物，供给一个固体基质。最终经过洗脱，除掉没有沉积的杂质。

  为了除掉已破碎的或固定差的细胞，在用于免疫沉积（效果）之前能够与纤细地金黄色葡萄球菌细胞，假如要用蛋白质ASephrarose树脂,参阅厂家说明书。

  运用高浓度盐将蛋白质分出（盐析），挑选硫酸按是因为：盐析有效性，pH规模广，溶解度高，溶液散热少，经济。

  着重低温（0-4度以下）是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙酮等。留意：Mg2++离子，pH值。

  PEG是一个水溶性非离子多聚体，运用PEG时旨在单个状况下才会是蛋白质稍有变性！他溶解是散热低，构成沉积的平衡时间短，一般到达30%时蛋白质就会到达最很多的沉积。

  做这个试验的时，我同一批次提取的蛋白，胶跑出的条带都不共同，这是什么原因呢？

  我做WB也不算是新手，自己觉得整一个完好的进程也没什么显着的问题，但是最终发光的时分内参整个是晕开的，分子还连成了一条线，之前没呈现过这样的一种状况，所以想请我们帮助剖析下，是胶的问题，蛋白的问题，仍是什么其他，谢啦！