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1、 鱼精蛋白鱼精蛋白是存在于许多鱼类的成熟精是存在于许多鱼类的成熟精细胞中的一种碱性蛋白，分子量较小，大细胞中的一种碱性蛋白，分子量较小，大约为约为000，精氨酸精氨酸占其氨基酸组成占其氨基酸组成的三分之二以上的三分之二以上 1、鱼精蛋白 鱼精蛋白的结构鱼精蛋白的结构 鱼精蛋白的结构因鱼种不同而有差异，但鱼精蛋白的结构因鱼种不同而有差异，但是它们存在许多相似的特征，如是它们存在许多相似的特征，如N-N-端均为精氨端均为精氨酸或者丙氨酸，各种鱼精蛋白分子肽链中都含酸或者丙氨酸，各种鱼精蛋白分子肽链中都含有有4 4个较长的和个较长的和2 2个较短的个较短的精氨酸簇精氨酸
5、合，形成稳定的复合物，从而的复合物，从而使肝素失去抗凝能力使肝素失去抗凝能力。尚具有轻度抗凝血酶原激酶作用，临尚具有轻度抗凝血酶原激酶作用，临床一般不用于对抗非肝素所致抗凝作床一般不用于对抗非肝素所致抗凝作用。用。 小鼠急性毒性实验、蓄积毒性实验、小鼠骨髓小鼠急性毒性实验、蓄积毒性实验、小鼠骨髓微核实验、小鼠睾丸染色体畸变实验等的结果表微核实验、小鼠睾丸染色体畸变实验等的根据结果得出，鱼精蛋白的明，鱼精蛋白的LD5010g/kg，蓄积系数，蓄积系数K 5 ，对雄性小鼠骨髓微核率没有增加作用，对小鼠睾对雄性小鼠骨髓微核率没有增加作用，对小鼠睾丸初级精母细胞染色体没有致畸作用。采用丸初级精母细胞染色体
6、没有致畸作用。采用Ames法对鱼精蛋白的致突变性进行了试验，也未法对鱼精蛋白的致突变性进行了试验，也未 发现发现其具有致突变作用。其具有致突变作用。（1）来源 蓝 藻 （ C y a n o p h y c e a e ） 、 红 藻（Rhodophyceae）、隐藻（Cryptophyceae）和少数一些甲藻（Pyrrophyceae）中，它是藻红蛋白、藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白和异藻蓝蛋白的总称。按照光谱类型来分类，藻胆蛋白则可大致分为六大类：异藻蓝蛋白B（APB）、异藻蓝蛋白（AP）、藻蓝蛋白（PC）、藻红蓝蛋白（PEC）、藻红蛋白I（PE I）和蓝藻中含藻尿胆素的藻红蛋白（PE）。2、藻胆蛋白
7、l螺旋藻的藻蓝蛋白l紫球藻的B-藻红蛋白l卤腥藻和念珠藻的C-藻蓝蛋白微藻藻胆蛋白的研究特别的重要l比如藻蓝蛋白在可见光区620nm的吸收与紫外光区280nm的吸收之比大于4.5，而异藻蓝蛋白在可见光区650nm的吸收与紫外光区280nm的吸收之比大于4.0。（2）藻胆蛋白分子的组成 藻胆蛋白是由脱辅基蛋白（载体蛋白）和四吡咯结构的色基（发色团）藻胆素所组成。发现所有的色基均是与多肽链中的半胱氨酸残基以硫醚键共价结合，结合的方式分别是通过色基的A环或者D环单链相连，也有的色基A环和D环同时与脱辅基蛋白相连。在藻胆蛋白的色基色基分为：藻红胆素（PEB）、藻蓝胆素（PCB）、藻尿胆素（PUB）。（3
8、）主要特征藻胆蛋白是一种古老的捕光色素蛋白质。组成藻胆蛋白的氨基酸发生了一些特异性修饰，使之免遭蛋白酶的水解。蛋白质的一种保护机制蛋白质的一种保护机制（4）生理活性1、R-R-藻红蛋白藻红蛋白可以和胰岛素抗体产生特异的免疫反应，这表明R-藻红蛋白的构象或结构的某些部位和胰岛素有某些特定的程度的相似，可能对糖尿病有一定的疗效。2、藻胆蛋白能刺激人B-淋巴细胞的增殖反应，提高机体的免疫力。3、与血红素结构相似，在相似消化环境下，藻蓝蛋白可以和铁形成可溶性化合物，提高铁的吸收率。4、从螺旋藻中提取的藻蓝蛋白，动物实验表明它有极强的抗癌作用，尤其是对肝癌细胞。安全无毒，藻类含量极为丰富，食品色素和化妆品5
9、、藻胆蛋白结合激光辐射，可以轻松又有效地杀伤肿瘤细胞。l0.25mg/ml藻蓝蛋白处理小白鼠骨髓瘤细胞，与对照组相比，激光辐射后细胞存活率由15%提高到71%，且对骨髓造血具有刺激作用。提示可用于临床治疗血液病及血癌。l低浓度的藻红蛋白，分别对人口腔8113癌细胞和小鼠S180瘤细胞的杀伤率高达75%和76%。这种光敏杀伤作用与藻胆蛋白的浓度规律附合曲线） 以此可以推导治疗中藻胆蛋白用量和调节激光能量大小，以发挥最大的杀伤效能。l海洋附着生物能永久或暂时性地黏附于各种固体表面, 对海上生产、运输等都带来不小的麻烦。 但另一方面, 海洋
10、附着生物所分泌的黏附物质在水下所体现出来的优异黏附性能是目前其他的粘合剂所不能取代的。l目前主要有两类：贻贝的足丝蛋白( mussel foot protein) 和藤壶胶 ( Barnacle cement ) 3、黏附蛋白l藤壶属于节肢动物门、甲壳纲、蔓足目、藤壶科，是附着在海边岩石上的一簇簇灰白色、有石灰质外壳的小动物。l藤壶，虽属甲壳动物，但成体却既不游泳，也不爬行，而是营固着生活。 l藤壶粘液的粘性甚强，甚至藤壶的化石经过几千年的沧桑仍牢固地附着在其他物体上。人工合成这种粘液，可用来补牙，粘接建筑材料（又称超级水泥）；还可用来修船和粘接漏洞；在医疗上粘合伤口，手术开刀后只需涂上这种粘
11、液即可。l贻贝属软体动物门 Mollusca、 瓣鳃纲 Lamellibranchia、 翼形亚纲 Pterimorphia、 贻贝目 Mytioida、 贻贝科l贻贝足丝中富含蛋白质成分, 从外形上可大致分为两部分, 足丝纤维 ( byssus ) 和足丝盘 ( pad)。贻贝的足丝蛋白的粘合力粘合力及防水性能防水性能极强且无毒无毒性, 是现有任何粘合剂均不能够比拟的, 因此在医药、 造船、 涂料等行业具有广泛的应用前景。l从加州贻贝和紫贻贝足丝中鉴定到至少8 种足丝蛋白mfp , 分别为 mfp- 1 mfp- 6、 胶原蛋白preColD和 preColNG。l胶原蛋白主要构成贻贝足丝纤维的
12、核心骨架部分并延伸至足丝盘; lmfp- 1则覆盖在整个足丝表面而构成足丝的保护外套, 以防止海水的溶解及微生物的降解。lmfp- 2 mfp- 6 则主要定位于贻贝的足丝盘, 是贻贝足丝用以和外界固体表明产生黏附的主要蛋白成分l以上足丝蛋白分子量从 5 kDa ( mfp- 3) 240 kDa ( preCol- D) 不等, 但仍具有一些相似的理化性质, 例如, 它们的等电点相似, 均为碱性蛋白 ( pI9) , 并且成熟足丝蛋白大都含有大量的翻译后修饰的3, 4-二羟基苯丙氨酸 ( 3, 4-dihydroxyphenyl- L- alanine, DOPA)。l贻贝足丝纤维的主要成分
13、, 分子量达到了108kD。l一级结构具有7580个串联起来的十肽重复单元。其序列中通常含有2 种修饰性氨基酸DOPA DOPA 和和羟基脯氨酸羟基脯氨酸。十肽重复单元十肽重复单元是高度亲碱和亲水性的，且DOPA 含量较高，通过交联和络合将大量铁离子交联和络合将大量铁离子变为坚韧而致密的涂层，保护其结构免受磨蚀和细变为坚韧而致密的涂层，保护其结构免受磨蚀和细菌等微生物的降解菌等微生物的降解。lmfp-1mfp-1的糖基化和羟基化程的糖基化和羟基化程度均非常高, 肽链交联紧密, 所以结构异常复杂，并且不同来源的 mfp- 1 在结构上存在比较大差异。l mfpmfp- 1 - 1 在贻贝足丝中主要
14、负责对足丝的保护在贻贝足丝中主要负责对足丝的保护, , 而而非与外界的粘合作用。非与外界的粘合作用。l Mfp-2最早从地中海贻贝 Mytilus galloprovincialis 的足丝中分离到, 其分子量为 45 kDa；l序列中同样含有 DOPA, 但含量较低 ( 5 mol%) , 一个重要特征是其序列中含有大量半胱氨酸半胱氨酸l因mfp- 2主要定位在足丝盘, 因此推测该蛋白可能与足丝盘黏附蛋白之间形成交联有关。lMfp-3 的DOPA 摩尔分数较高，分子量为57 kD，无重复单元，且富含精氨酸，这些残基有许多被修饰成4-4-羟基羟基-L-L-精氨酸精氨酸(R)(R)。lMfp-
15、 3 存在很强的蛋白多态性现象, 例如, 在加洲贻贝足丝蛋白中检测到 mfp- 3 有 20 多种, 氨基酸残基从 42 到 54 个不等, 序列相似性较高。l不同贻贝来源的mfp- 3 在其分子量, DOPA 含量, 序列方面均有有较高的相似性, 特别是在其序列的C 端,均存在一个Gly- Trp- Asn- X- Gly- Trp- X( X 为Lys 或者Asn) 的七肽片段lmfp- 4也是一种定位于足丝盘的黏附蛋白,是一类质量为93 kD的蛋白质。lmfp- 4 的序列中有 36 个富含组氨酸His ( 22 mol%)的十肽重复片段; 此外Lys、 Arg以及Asp 的含量也较高;
16、表现在N端和C端分别含有 16 个富含 Asp 的十一肽重复片段。但DOPA 的含量仅2 mol%。l推测这类大质量的蛋白质在足丝附着基中很可能是起稳定作用 。lMfp-5分子量9kDa左右，含74个残基l序列中DOPADOPA的摩尔分数达到的摩尔分数达到30%30%。Mfp-5中超过1/3的残基是翻译后被羟基化或磷酸化修饰，其中酪氨酸羟基化作用转变为DOPA，或丝氨酸磷酸化作用转变为O-O-磷酸丝氨酸磷酸丝氨酸。研究之后发现，因含磷酸丝氨酸的蛋含磷酸丝氨酸的蛋白质对钙的亲和力很强白质对钙的亲和力很强，被修饰后的磷酸丝氨酸有助于贻贝附着在毗邻的贻贝外壳上，解释了为何Mfp-5中含有如此高的O-磷酸
17、丝氨酸。l研究之后发现足丝蛋白的粘合性能与 DOPA含量呈正相关。mfp- 3 和 mfp- 5 因低分子量和高低分子量和高DOPADOPA含量含量以及由此表现的强的粘合能力而成为贻贝粘合蛋白研究中最受关注的两个蛋白分子 lMfp-6也是一种定位于足丝盘中的黏附蛋白, 分子量 11.6 kDal序列中含量最丰富的氨基酸是酪氨酸 Tyr ( 20.2 mol%) , 其次是 Gly ( 14.1 mol%) , Cys 的含量也较高 ( 11 mol%) , 且约有 1/3 的Cys保留了自由的巯基, 但 DOPA的含量不到 5 mol%l mfp- 6 与足丝盘黏附蛋白的固化黏附蛋白的固化有很大关
18、系, 它能通过含自由巯基的半胱氨酸 Cys 介导足丝盘黏附蛋白分子中的DOPA之间形成交联结构。l胶原蛋白 preColD 和preColNG 主要构成贻贝足丝纤维的核心骨架部分(fibrous core)并延伸至足丝盘lmfp- 4 可能负责足丝纤维中的胶原蛋白 与足丝盘的黏附蛋白之间的连接, 同时在足丝盘黏附蛋白之间也发挥着连接作用。l糖蛋白(glycoprotein)是指由链较短、往往带分支的寡糖与多肽链某些特定部位的羟或酰氨基以共价键形式连接的一类结合蛋白质，在生物体内广泛存在糖生物学 (glycobiology)。l糖蛋白中的糖链对蛋白质的功能起重要修饰作用，如糖链影响蛋白质的构象、
19、折叠、溶解度、半衰期、构象、折叠、溶解度、半衰期、抗原性及其他生物活性抗原性及其他生物活性。l由于糖蛋白研究的复杂性，对海洋动物中糖蛋白的研究相对较少，近年来才陆续开展起这方面的研究工作，多集中在粗提物的生理、药理活性研究方面，对均一的糖蛋白的结构和构效关系方面的研究报道则较少。 4、糖蛋白抗肿瘤抗肿瘤l生物活性肽是介于氨基酸与蛋白质之间的分子聚合物，它小至由两个氨基酸组成，大至由数百个氨基酸通过肽键连接而成，具有十分重要的生物学意义。l生物活性肽的生物学意义大多数表现：吸收机制优于蛋白质和氨基酸（指小肽）具有氨基酸不可比拟的生理功能l两类海洋生物多肽：多肽：天然存在天然存在与与酶解酶解得到的
20、得到的多肽多肽天然存在的海洋生物活性肽的种类：海绵多肽、海天然存在的海洋生物活性肽的种类：海绵多肽、海鞘多肽、海葵多肽、芋螺多肽、海藻多肽、鱼类多鞘多肽、海葵多肽、芋螺多肽、海藻多肽、鱼类多肽、贝类多肽、海星多肽、海兔多肽等肽、贝类多肽、海星多肽、海兔多肽等由于海洋的特殊环境，组成海洋多肽化合物的氨基由于海洋的特殊环境，组成海洋多肽化合物的氨基酸除常见的氨基酸外，还有酸除常见的氨基酸外，还有- -氨基异丁酸氨基异丁酸等多种海等多种海洋天然产物特有的氨基酸类型，具有多种生理活性洋天然产物特有的氨基酸类型，具有多种生理活性l1. 1 海鞘多肽l海鞘(Ascidian) 属于脊索动物门,海鞘纲与尾索
21、动物亚门的另外两个纲称为被囊动物( Tunicate) ,约有2000 种,海鞘是被囊动物中种类最丰富、含有重要生物活性物质最多的一类。海鞘多肽是存在于海鞘中的海鞘多肽是存在于海鞘中的环肽环肽， 对L1210鼠性白血病细胞，ID50为0.35g/ml。 它们对RNA病毒和DNA病毒的增殖有抑制作用，对白血病细胞和B16黑色素瘤细胞有毒性作用。其中didemnineB的抗癌作用最强，只需0.0011g/ml的浓度就能抑制白血病细胞的生长，目前已进入临床试验，是很有发展前途的抗癌物质。去氢膜海鞘素 l1. 2 海兔多肽l海兔属于海洋腹足类软体动物。对海兔抗肿瘤括性肽的研究最早由Pettit小组以小
22、鼠白血病淋巴瘤模型P388为筛选体系，对耳状截尾海兔（dolabella auricularia）进行系统的抗癌活性成分追踪分离，已分离到dolastatin118，多为环肤类，具有着强烈抑制肿瘤细胞生长的作用。其中dolastatin 3(2-9) 对P388肿瘤细胞的ED50为2.7l0-7 1g mL-1。机理：抑制微管聚合，促进其解聚，干扰肿瘤细胞的有丝分裂，对许多癌细胞有诱导凋亡作用，是一种细胞生长抑制剂(cytostasis)。环脯-亮-缬-谷酰胺）Thz-(甘)Thzkahalalide Fkahalalide F 海洋环肽具有强的抗病毒和抗肿瘤活性,这些环肽主要来自于海鞘和海兔
23、1. 3 海葵多肽l文献报道从海洋生物海葵中提取得到的溶细胞性活性肽有：l(1) 存在于16 种海葵中的鞘磷脂抑制性碱性多肽,平均相对分子质量在15，00021，000 之间。l(2) 从Metrid rumsenile 属海葵中分离得到的具胆固醇抑制活性肽,其平均相对分子质量在80，000 左右。l1. 4 海绵多肽v海绵多肽是存在于离海绵目、海绵多肽是存在于离海绵目、外射海绵目、石海绵外射海绵目、石海绵目目、软海绵目以及硬海绵目等海绵中的环肽化合物，、软海绵目以及硬海绵目等海绵中的环肽化合物，目前已分离得到近目前已分离得到近4040种。种。vdiscoderminsdiscodermins
24、 A AD D是从日本伊豆诸岛海域采集的海是从日本伊豆诸岛海域采集的海绵中获得，绵中获得，A A可抑制枯草杆菌和奇异变形杆菌，具有可抑制枯草杆菌和奇异变形杆菌，具有抗炎作用。抗炎作用。A AD D均能抑制海星胚胎发育，且是磷酯均能抑制海星胚胎发育，且是磷酯酶酶A2A2的有效抑制剂，的有效抑制剂，IC50IC50为为350350700nmol700nmolL L-1-1。 l1. 5 1. 5 芋螺多肽芋螺多肽l芋螺芋螺( (ConusConus) ) 是海洋腹足纲软体动物是海洋腹足纲软体动物, ,其在猎取鱼、其在猎取鱼、海洋蠕虫、软体动物时常分泌一系列毒性物质海洋蠕虫、软体动物时常分泌一系列毒
25、性物质, ,称称为芋螺毒素为芋螺毒素( (ConotoxinConotoxin) )即芋螺多肽。即芋螺多肽。 目前已发现的芋螺毒素有近百种，大多为由目前已发现的芋螺毒素有近百种，大多为由10103030个氨基酸残基组成的小肽，富含两对或三个氨基酸残基组成的小肽，富含两对或三对二硫键，是迄今发现的对二硫键，是迄今发现的最小核酸编码的动物神最小核酸编码的动物神经毒素肽，也是二硫键密度最高的小肽经毒素肽，也是二硫键密度最高的小肽。主要有。主要有-芋螺毒素、芋螺毒素、-芋螺毒素、芋螺毒素、-芋螺毒素及芋螺毒素及-芋螺毒素等。其活性与蛇毒、蝎毒等动物神经毒芋螺毒素等。其活性与蛇毒、蝎毒等动物神经毒素相似
26、素相似, ,可引起动物出现惊厥、颤抖及麻痹等症状可引起动物出现惊厥、颤抖及麻痹等症状花冠芋螺织锦芋螺番红花芋螺将军芋螺l1. 8 生物防御素l生物防御素(Defensin) 是近年来发现的一组新型抗菌活性肽。它们通常都是由3550 个氨基酸残基组成,且分子内富含二硫键。由于其具有牢固的分子骨架、广泛的分布以及生物活性功能,因而对它们的研究已成为当前国际学术界中一个引人关注的研究热点。v海藻多肽已从绿藻、蓝藻等中分离得到。海藻多肽已从绿藻、蓝藻等中分离得到。据报道，利用绿藻水提物制得一种内含活据报道，利用绿藻水提物制得一种内含活性多肽成分。从培养的蓝藻中也分离出一性多肽成分。从培养的蓝藻中也分离
27、出一种具有种具有鱼毒性、抗菌、杀细胞活性的生物鱼毒性、抗菌、杀细胞活性的生物活性肽活性肽, , 已具备大规模生产能力。另外，已具备大规模生产能力。另外，还从海藻还从海藻PyymnesiumPyymnesium patelliferumpatelliferum属中提属中提取出一种毒素肽取出一种毒素肽HormothaminHormothamin，从蓝，从蓝- -绿海绿海藻属藻属LyngbyaLyngbya majusculamajuscula中分离得到具有细中分离得到具有细胞毒活性的环肽胞毒活性的环肽MajusculamideMajusculamide C C 存在于鱼贝类组织中的天然肽类只有:三
28、肽的谷胱甘肽；是一种特殊的Aa衍生物，又是含有巯基的三肽； 鹅肌肽、鲸肌肽：属咪唑化合物，统称为咪唑二肽，是肉品风味的前体物质。 这些咪唑化合物一般在游泳能力强的鱼类及鲸类肌肉中含量较多，因为咪唑环的pK值在生理pH附近，被认为是具有缓冲作用的物质。l 天然存在的活性肽大部分或含量微少,或提取难,不足以大量生产供给所需;化学人工合成又费时费力,成本昂贵;因此,人们更多地把目光投向开发蛋白酶解产物这条途径上来。l水解营养蛋白生产生物活性肽的理论依照水解营养蛋白生产生物活性肽的理论依照: : 在贮藏、营养蛋白的多肽链内部可能都会存在着功能区,选择适当的蛋白酶水解,这些多肽有可能会被释放开来,从而制备
29、各种各样的生物活性肽。目前，应用于酶解海洋动物蛋白的酶其实是陆源蛋白酶，包括胰蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、热菌蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胶原蛋白酶、木瓜蛋白酶等l 从生物进化上看从生物进化上看, ,营养和贮藏蛋白应该营养和贮藏蛋白应该是从功能蛋白进化而来的是从功能蛋白进化而来的, ,因为原始的生物因为原始的生物是不可能合成大量此类蛋白的。当生物进是不可能合成大量此类蛋白的。当生物进化到需要为后代发育提供营养时化到需要为后代发育提供营养时, ,它不可能它不可能凭空制造出一种营养蛋白凭空制造出一种营养蛋白, ,最好的方法就是最好的方法就是通过若干功能区通过若干功能区( (结构域结构域,
30、,DomainDNADomainDNA） “组装组装”出营养或贮藏蛋白基因。所以出营养或贮藏蛋白基因。所以, ,在在不同的营养和贮藏蛋白的多肽中可能广泛不同的营养和贮藏蛋白的多肽中可能广泛存在着不同的功能区存在着不同的功能区, ,选择适当的蛋白酶就选择适当的蛋白酶就可将其释放开来可将其释放开来, ,还原其功能特性还原其功能特性, ,通过这通过这种办法能够获得相当广泛的生物活性短肽。种方法能够得到相当广泛的生物活性短肽。l从免疫学看从免疫学看, ,尽管不同的生物都具有功能上非常相似的蛋白质,但是由于其非功能区存在着较大氨基酸差异,所以不能互相使用,因为生物正是通过免疫系统识别自身蛋白和外来蛋白的
31、这些非功能区的差异来清除异己和保持自身稳定性的。如果我们把注意力放在这些具有不一样生理功能的生物活性短肽上,则我们可能有效地避免免疫排斥反应的困扰。l例如例如, ,乳转铁蛋白用于注射可能会产生免疫排斥反应,但如果用其水解所得到的短肽,就可能安全地用于注射。l又如又如, ,实验证明免疫活性肽和白细胞介素相似,可以激活T 细胞和巨噬细胞,从而增强机体免疫力,虽然它来源于动物蛋白,但研究表明它可能安全地用于医药。 易消化吸收（比氨基酸更易吸收）、保护胃粘膜及抗溃疡作用、抗菌、抗氧化、抗过敏、降血压、降胆固醇、抗衰老、抑制肿瘤细胞生长、抑制AIDS病毒、促进伤口愈合、增强骨强度和预防骨质疏松、预防关节炎
32、、促进角膜上皮损伤的修复和促进角膜上皮细胞的生长等原l活性评价方法：体外实验法和动物实验法。l体外实验法：1971年Cushman建立了体外紫外光度法在37、pH8.3即模仿体内环境的条件下, ACE降解血管紧张素I的模拟物Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine (HHL)产生马尿酸，当加入降血压肽抑制ACE的降解作用后，马尿酸的生成量减小，通过在紫外228nm处测量马尿酸的光吸收值得到马尿酸的生成量，从而评价降血压肽的压制效果。l 从海洋低值鱼虾中分离出具有抗高血压活从海洋低值鱼虾中分离出具有抗高血压活性的活性肽。其氨基酸序列如下性的活性肽。其氨基酸序列如下: :lC8
34、(南极磷虾南极磷虾) :) :LeuLeu-Lys-Tyr-Lys-Tyr提高抑制血管紧张素转化酶ACE的活性而具有降压功能。水解Pr条件温和，食用安全性极高，突出优点是对血压正常的人无降压作用。l 从从鳕鱼鳕鱼排中分离得到的分子量分别为排中分离得到的分子量分别为30K,10K,5K30K,10K,5K和和3K3K的四种活性寡聚肽，具有的四种活性寡聚肽，具有ACE ACE 抑制活性，且抑制活性，且ACEACE抑制活性随相对分子量抑制活性随相对分子量降低而明显地增加，分子质量为降低而明显地增加，分子质量为3 K3 K 的多肽具的多肽具有有最强的最强的ACE ACE 抑制活性抑制活性 。此肽具有非常好的
35、水。此肽具有很好的水溶性，且无苦味，因此溶性，且无苦味，因此, ,更易投入实际应用。更易投入实际应用。 相对分子质量为相对分子质量为5 K5 K的多肽具有非常明显的的多肽具有非常明显的抗氧化活性抗氧化活性, ,其抗氧化活性与其抗氧化活性与-生育酚相当。生育酚相当。1 实验方法1.1 选取复合蛋白酶P1，在不同酶解条件下对贻贝蛋白进行水解，采取Uniform Design(均匀设计)方案，研究不同酶量、酶解时间、酶解温度、pH等因素对ACE的压制效果，并选择最佳的酶解条件。1.2 酶解液经纯化、加入活性修饰剂MAl，提取，冷冻干燥，制备降血压肽，进行活性检测。文献阅读1.3 酶解样品ACE压制效果评价l
36、用紫外分光光度法分析不同酶解条件下制备的酶解降血压肽的ACE抑制活性。228nm下测定其吸光值。l将各酶解液反应值与空白样品对照，分析所得酶解降压肽的ACE抑制率P： P=A-A(control)/A1001.4 高效液相色谱法测相对分子质量-标准曲线法l色谱条件：Waters 600高效液相色谱仪；色谱柱：TSK gel 2000；流动相：V(乙腈)：V(水)：V(三氟乙酸)=45：55：01，检测波长：220 nm，体积流量：05 mL/min，柱温：30。l相对分子质量校正曲线所用标准品：细胞色素c(MW 12500)，抑肽酶(MW6500)，杆菌酶(MW 1450)，乙氨酸-乙氨酸-酪
37、氨酸-精氨酸(MW 451)，乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(MW 189)。l取酶解降血压肽溶解，定容，取上清液滤纸过滤，再用022um微孔滤膜过滤，以供进样。1.5 降血压肽氨基酸组成分析l水解氨基酸检测：取样品，加6 mol/L盐酸水解，110，24h，然后用03 mm膜微孔过滤，定容，进样氨基酸自动分析系统来进行检测。l 游离氨基酸检测：取样品，加水溶解，超声波振荡混匀，加适量盐酸调酸，0.3 mm膜微孔过滤，定容，进样氨基酸自动分析系统进行仔细的检测。1.6 降血压肽的动物试验l 将样品以3.0 gkg-1体重的剂量进行灌喂。灌喂前和灌喂之后第2、4、6、8、10小时分别检测收缩压1次，记录各血压值
38、。2 结果及讨论2.1 酶解条件对降血压肽ACE抑制率的影响 回归分析得回归方程：Y=70.464-1.195X1+15.299X2+11.971X3-4.310X22+0.194 X1X2-0.141X3X4 由此最佳的ACE抑制活性为90.23，但试验结果ACE抑制率为8655。 2.2 降血压肽的相对分子质量组成检测结果 降血压肽样品相对分子质量范围在1.6 ku以内，从11.6ku，即lO15、16肽的范围，其含量为49.66，0.61ku，即5 10肽范围，样品含量为15.73，0.20.6ku范围内为796，主要为2肽4肽的小肽。 目前比较公认的是酶解降血压肽的分子量相对于蛋白质来
39、说较小，一般在几个ku以内。2.3 降血压肽的氨基酸组成检测结果l分析氨基酸组成与酶解质量和降血压活性之间的关系 样品含有较高比例的必需氨基酸 8.57水解氨基酸总量为59.6 游离氨基酸总量为8.8 谷氨酸被认为能促进脑细胞进行呼吸，利于脑组织中氨的排除，调节人体的新陈代谢，而这将会对血压造成一定的影响2.4 降血压肽的降压效果l 处理4 h和6 h血压变化的F值0.05(2，9)，说明服用降血压肽4 h和6 h效果有显著差异；l 降血压肽在26 h之内的降压效果具有非常明显性(P=005)，血压平均降低幅度为1828mmHg。在6 h处降压效果达到最大值为28mmHg，且效果极为显著(P=00
40、1)。 水生动物抗菌肽的研究主要集中于甲壳纲动物水生动物抗菌肽的研究主要集中于甲壳纲动物: :l19881988年，从中国鲎血细胞用酸提取法得到一种含年，从中国鲎血细胞用酸提取法得到一种含17 17 个氨基酸的抗菌肽个氨基酸的抗菌肽鲎素，能与细菌细胞壁鲎素，能与细菌细胞壁中的脂多糖成分结合形成复合物，在很低浓度下中的脂多糖成分结合形成复合物，在很低浓度下就能抑制就能抑制G G- -及及G G+ +细菌的生长。鲎素在低细菌的生长。鲎素在低pHpH、高温、高温下相当稳定，是一种有应用前景的抗菌活性物质。下相当稳定，是一种有应用前景的抗菌活性物质。19951995年，从年，从鲎鲎体中分离得到一个体中
41、分离得到一个79 79 肽肽, ,与兔和牛与兔和牛的的嗜中性白血球防御素嗜中性白血球防御素相似相似; ;lNogaNoga 等认为美洲等认为美洲蓝蟹蓝蟹的血细胞具有抗菌活性的血细胞具有抗菌活性; ;lSchnappSchnapp 等从等从青缘蟹青缘蟹的血细胞中分离得到的血细胞中分离得到3 3 种具种具有杀菌作用的肽有杀菌作用的肽, ,它们能够它们能够选择性地作用于细菌外选择性地作用于细菌外层细胞膜的某些组分层细胞膜的某些组分, ,如带阴离子的磷脂如带阴离子的磷脂, ,增大其增大其渗透性而杀死或抑制细菌的生长渗透性而杀死或抑制细菌的生长; ; lChisholm Chisholm 等研究包括等研
42、究包括龙虾龙虾和和对虾对虾在内的在内的8 8 种甲壳种甲壳动物的动物的血细胞溶泡上清液血细胞溶泡上清液对数种细菌的杀菌作用对数种细菌的杀菌作用, ,证明其含有能杀灭细菌的因子证明其含有能杀灭细菌的因子; ; lSongSong等发现等发现罗氏沼虾罗氏沼虾受感染后会诱导产生类似杀受感染后会诱导产生类似杀菌肽类的物质；菌肽类的物质；lDestoumieuxDestoumieux 等从养殖的等从养殖的南美白对虾南美白对虾的血细胞和的血细胞和血浆中分离出几种抗菌活性因子血浆中分离出几种抗菌活性因子, ,其中其中3 3 种具有种具有抗抗真菌和抗细菌尤其是抗革兰阳性菌真菌和抗细菌尤其是抗革兰阳性菌的活性。
43、的活性。lAzumiAzumi 等从一种等从一种海鞘海鞘HalocyHalocy amine amine roretziroretzi 的的血细胞中分离得到的抗菌肽血细胞中分离得到的抗菌肽HalocyamineHalocyamine A A 不仅不仅在体外可在体外可抑制某些鱼抑制某些鱼RNA RNA 病毒的生长病毒的生长, ,也能抑制某也能抑制某些海水细菌的生长些海水细菌的生长。lFernandesFernandes 等从等从虹鳟鱼皮虹鳟鱼皮中分离得到一种具有抗中分离得到一种具有抗菌作用的白肽菌作用的白肽, ,在在抵御胞内或胞外病毒抵御胞内或胞外病毒方面起方面起着关键作用。着关键作用。
44、l最近的研究发现最近的研究发现, ,鱼类鱼类中也存在大量的抗菌中也存在大量的抗菌肽肽 Oren Oren 等从等从豹鳎豹鳎中分离得到一种中分离得到一种33 33 肽肽的抗菌肽的抗菌肽, ,具有比具有比蜂毒素蜂毒素更强的抗菌活性更强的抗菌活性, ,其作用可与其他天然的抗菌肽如蛙皮素、其作用可与其他天然的抗菌肽如蛙皮素、杀菌肽等相比杀菌肽等相比; ;电镜观察显示其抑菌机理是电镜观察显示其抑菌机理是溶解细菌的细胞壁溶解细菌的细胞壁。 Conlon Conlon 等从等从海七鳃鳗海七鳃鳗的皮肤上分离得的皮肤上分离得到到富含半胱氨酸和精氨酸富含半胱氨酸和精氨酸的多肽的多肽, ,其氨基酸其氨基酸序列与老鼠
47、富含它富含8 8 个胱氨酸，具有广谱抗细菌、个胱氨酸，具有广谱抗细菌、抗真菌活性。抗真菌活性。p材料：长牡蛎、大连湾牡蛎和近江牡蛎的肉p菌株 溶壁微球菌、生孢梭菌CMCC(B)64941、白色念珠菌CMCC(F)98001、金黄色葡萄球菌JP-04-08、ATCC25922 、表皮葡萄球菌BP-04-18 、大肠埃希氏菌PC-04-21、ATCC25923 、铜绿假单胞菌LN-04-12、ATCC27853、变形杆菌BX-04-10、肺炎克雷伯杆菌、肠球菌、不动菌属。p质控菌株 金黄色葡萄球菌ATCC 25922、大肠埃希氏菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853。美国模式培养物
48、保藏所中国生物制品检定所p 方法l1. 1. 抗菌蛋白的制备抗菌蛋白的制备1.1粗蛋白的制备：取鲜活牡蛎510 kg,以纯水冲洗后取牡蛎软体,洗净沥干约500 g，经粉碎、低温研磨过100目筛,按重量比(w/w)11加入注射用水,在14搅拌提取68 h,匀浆液离心(4000 r/min,40 min),得蛋白粗提上清液。1.2液体浓缩蛋白的制备：将获得的粗提液采用SMB220生物型错流超滤系统分级(膜截留分子量为50 kDa),再以截留分子量为10 kDa的膜浓缩5倍。浓缩液密闭存放或制备成冻干粉。1.3蛋白的分离纯化：取超滤浓缩液2.0ml,上样于pH 3.8柠檬酸-Na2HPO4缓冲液充分
49、平衡后的CM-Sepharose FF层析柱(2.5 cm10 cm)进行层析,用200 ml含0-1.0 mol/L NaCl的缓冲液进行线性梯度洗脱,收集活性峰,脱盐浓缩后，上样到以pH 6.5NaH2PO4- Na2HPO4缓冲液充分平衡的SephadexG-100层析柱(1.6 cm60 cm)进行层析,用平衡液进行洗脱,收集活性峰,脱盐浓缩后20保存备用。以上纯化操作均在4进行。2 2 抗菌蛋白性质分析抗菌蛋白性质分析2.1纯度和分子量测定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定：蛋白浓缩液(10l,15l)直接上样进行SDS-PAGE分析,分离胶浓度为15,电泳条件:电压200 V,56 mi
50、n,用0.5考马斯亮蓝R250染色,使用不相同分子量的标准蛋白对抗菌蛋白进行分子量及其分布测试及分析。采用SDS-PAGE方法测定：纯化蛋白测定，分离胶浓度为12%,用0.5%考马斯亮蓝R250染色。2.2含氮量测定取3批次(200305021、20030808、20040411)牡蛎海洋溶菌酶冻干粉按照中华人民共和国药典(2000年版二部)附录D氮测定法测定。3 3 体外实验体外实验 3.1 最低抑菌浓度（MIC)测定采用平皿二倍稀释法和Denlay多点接种器进行药敏试验，试验菌用营养肉汤及脑心浸液增菌;抗菌蛋白海洋低温溶抗菌蛋白海洋低温溶菌酶菌酶用水解酪蛋白琼脂(MH) 肉汤二倍稀释成各种所
51、需浓度,分别加适量至平皿中，MH 培养基熔化后定量注入含药液平皿内混匀：生孢梭菌最终浓度为15106 cfu/ml,白色念珠菌18106cfu/ml,其他菌液为1105 cfu/ml,需氧菌37培养18 h,线 h,厌氧菌置厌氧孵箱3035孵育48 h后观察结果,无菌生长的平皿中所含药物最小的浓度即为MIC。 3.2 最低杀菌浓度MB测定采用试管二倍稀释法,先测出试验菌的MIC,再依次将未见细菌生长各管培养液分别吸取0.1 ml,转移到不含药液的琼脂平皿中,培养条件同MIC测定,观察测定结果,平皿上菌落数5个的最小药物浓度即为MBC。4 4 透射电镜观察抗菌蛋白对大肠埃希氏菌
52、超微结构透射电镜观察抗菌蛋白对大肠埃希氏菌超微结构的变化的变化试验以正常大肠埃希氏菌培养12h制备透射电镜样品作阴性对照组。以LB液体培养基将抗菌蛋白稀释成1.25 mg/ml,加入对数生长期的大肠埃希氏菌,使浓度为1105 cfu/ml。摇床中培养(37 min,200 r/min)12 h,离心弃上清,沉淀用磷酸缓冲液洗涤3次,制备透射电镜样品。固定、脱水、切片和染色后,作为实验组。透射电镜下观察大肠埃希氏菌超微结构的变化。p 结果结果1 1 抗菌蛋白的分离纯化抗菌蛋白的分离纯化 抗菌蛋白经CM-Sepharose FF阳离子交换层析分离后,盐洗脱峰为活性峰,洗脱曲线、后上样于Sephadex G-100凝胶层析柱,洗脱曲线,第二个峰为活性峰,收集活性峰透析浓缩后作为纯化样品使用。2 2 抗菌蛋白性质分析抗菌蛋白性质分析2.1 抗菌蛋白纯度和分子量测定l由图a可见,牡蛎海洋溶菌酶为含多种蛋白的混合物,其分子量分布较宽,从10 KD一直到100 kDa都有分布,其中分子量分布在15 kDa和23 kDa左右的组分含量较多。l三批牡蛎海洋溶菌酶浓缩液均为多种蛋白的混合物,其电泳条带相同,各条带的分布及浓度基本相同,说明样品制备的重现性良好,工艺稳定,产品质量稳定,见图b。l 纯化样品为单一条带,由标准蛋白可知分子量约为39 kDa。2.2 含氮量测定 3批
54、次抗菌蛋白冻干粉蛋白含量见表。2.3 抗菌蛋白对生孢梭菌、白色念珠菌的抗菌作用抗菌蛋白对生孢梭菌最低抑菌浓度为0.0156%,最低杀菌浓度为0.0313%;对白色念珠菌最低抑菌浓度和最低杀菌浓度均为0.0625%2.4 抗菌蛋白对临床常见致病菌和标准质控菌株的抗菌活性表明抗菌蛋白对临床常见的致病菌拥有非常良好的抗菌作用且呈剂量依赖性对3株标准质控菌株也有较好的抗菌作用2.5 抗菌蛋白对大肠杆菌超微结构的作用研究结果l对照组:正常大肠杆菌形态为直杆状,细胞壁和细胞膜完整光滑,结构紧密,细胞膜紧贴细胞壁,细胞质均匀。l抗菌蛋白(1.25 mg/ml)组,大肠杆菌的形态发生改变,随时间的延长变化越来越明
55、显:作用1 h后,细胞壁松弛出现皱褶,菌体变短变粗,呈椭圆形,细胞质固缩;2 h后,大部分菌体呈圆球形;3 h后,菌体呈不规则形,细胞壁缺失,细胞质解体出现空腔,菌体裂解。lIwamoto 等研究了鲭鱼肽对低密度脂蛋白(LDL) 氧化的抑制作用。根据结果得出,鲭鱼肽能够显著延长氧化反应的诱导期。 对16 名平均岁数为19 岁的女性志愿者进行了体内抗氧化实验。对照期内食用含酪蛋白的食物,实验期内食用含鲭鱼肽的食物,剂量按16.9g 蛋白/ d,共10d。其他膳食组分同。提取静脉血试样测定LDL的氧化情况，根据结果得出,试验组第10d 时静脉血试样LDL 氧化的诱导期(66.2min) 比0d 时静脉血试
56、样LDL 氧化的诱导期(57.9min) 长,而对照组在0d 和10d 的静脉血试样LDL 氧化的诱导期之间不存在一定的差异。lKim Se-Kwon Kim Se-Kwon 等报道等报道, ,黄鳍舌鳎鱼皮胶原酶黄鳍舌鳎鱼皮胶原酶解得到的多肽也具备比较好的抗氧化活性。解得到的多肽也具备比较好的抗氧化活性。l采用现代生物工程技术采用现代生物工程技术, ,从从栉孔扇贝栉孔扇贝中提取中提取的海洋多肽的海洋多肽, , 相对分子质量为相对分子质量为800 800 1000 ,1000 ,经药理试验表明经药理试验表明, ,具有抗氧化损伤作用具有抗氧化损伤作用, ,能清能清除超氧负离子和羟自由基除超氧负离子和羟自由基
57、, ,延缓皮肤老化延缓皮肤老化, ,可可明显地增强免疫细胞的代谢和增殖明显地增强免疫细胞的代谢和增殖, ,是一种有是一种有潜力的抗氧化剂和免疫细胞调节剂。潜力的抗氧化剂和免疫细胞调节剂。1.1 材料、试剂与仪器l鳙鱼鱼鳔 水产批发商业市场；其他试剂均为分析纯。lSorvall Evolution RC 728411型冷冻离心机 美国热电公司；超滤设备及超滤膜 美国Millipower 公司；Lambada 25 型可见紫外检测仪 美国PE 公司；DS-1 高速组织捣碎机。1.2 菌种及培养基l米曲霉(Aspergillus oryzae) 中国工业微生物菌种保藏中心(CICC 40186)l种子培养基
58、( PDA)：马铃薯汁1000ml ，葡萄糖20 g ，自然pH 值。1.3 方法1.3.1 鱼鳔预处理 鱼鳔用离子水浸泡漂洗，按每100g鱼鳔加100ml去离子水进行均浆，匀浆液稀释到蛋白浓度5%(m/V)后进行巴氏灭菌(60，30min)，备用。1.3.2 发酵菌种的制备 从活化的菌种保藏斜面中挑取两环接种于种子培养基中，28、120r/min培养36h，使菌体浓度达到106CFU/ml。1.3.3 鱼鳔匀浆液发酵 按5%(V/V)将发酵菌株液接种于鱼鳔匀浆液28、120r/min 培养，于不同发酵时间取样。发酵液于410000r/min 离心30min，上清液经0.45m 微孔滤膜过滤，
59、滤液为鱼鳔多肽混合液，冷冻干燥，得鱼鳔多肽粗粉，冷冻保藏备用。1.3.4 超滤分离 用去离子水将发酵液配成10mg/ml的样液，分别通过截留分子量为10、3、1kD 的超滤膜进行超滤，收集不同截留分子量的滤液，分别编号为肽(Mw 1kD)、肽(1kDMw3kD)、肽(3kD Mw10kD)1.3.5 测定方法l 多肽含量的测定采用以酸可溶性多肽酸可溶性多肽计，将等体积的0.4mol/L三氯乙酸(TCA)加入到多肽混合液中，静置0.5h 后10000r/min离心10min，去除酸不溶性的蛋白和长链肽沉淀，用双缩脲法测定上清液中的多肽含量；测定发酵液水解度和平均肽链长度。l 清除O2-能力测定采
60、用NBT法；l 清除OH 能力测定采用D-2- 脱氧核糖法；l 抗氧化力测定采用亚油酸自氧化法。2.1 发酵过程中鱼鳔蛋白水解动态l配制多肽液浓度为10mg/ml，测定自由基清除能力和抗氧化能力。2.2 鱼鳔发酵液的抗氧化活性发酵时间发酵时间40h40h，水解度为，水解度为22%22%时，所得鱼鳔时，所得鱼鳔肽的抗氧化力最强。肽的抗氧化力最强。l鱼鳔多肽液经不同截留分子量的超滤膜超滤后，各片段滤液配成质量浓度为10mg/ml的多肽液，分别测定其自由基清除能力和抗氧化能力。2.2 超滤液的抗氧化活性由由5 512 12 个氨基酸残基组成片段具有较强抗氧化性个氨基酸残基组成片段具有较强抗氧化性l利
61、用微生物在发酵过程中所产的蛋白酶水解鱼鳔蛋白：鱼鳔营养成分全面丰富，良好的生长培养基；高含量的鱼鳔蛋白可被微生物酶水解，经过控制发酵时间，便可制备出链长适当，具有一定生理活性的鱼鳔多肽。显而易见，其生产所带来的成本低廉，因而十分适于工业化生产。lO2 和OH 等活性氧自由基诱导的氧化损伤一直被认为是引起衰老、细胞损伤和癌变的原因之一，鱼鳔肽富含供氢体，可使具有高度氧化性的自由基还原，从而能终止自由基连锁反应。l微生物发酵法尚存在一些不足，主要体现在发酵时间过长，肽链长度分布范围较广，后续分离纯化的困难。l对微生物发酵工艺来优化，缩短发酵时间；l控制好水解度(发酵程度)，建立不同发酵时间与分子量分布的
62、关系；l对鱼鳔多肽的体内抗氧化效果及其他的生理活性进行研究；l对制备所得鱼鳔多肽中具有非常明显生物活性的肽段序列进行测序，揭示结构和活性之间的构效关系。l 这类肽可作为肠道营养剂或以流质食物形式提供这类肽可作为肠道营养剂或以流质食物形式提供给处于特殊年龄或特殊身体健康情况下的人给处于特殊年龄或特殊身体健康情况下的人( (如消化能如消化能力不健全的新生儿力不健全的新生儿, ,消化能力退化的老年人消化能力退化的老年人; ;经过经过手术特别是消化道手术后的康复者或有待于治疗手术特别是消化道手术后的康复者或有待于治疗的病人的病人; ;由于过度疲劳、生活没有规律而胃肠功能由于过度疲劳、生活没有规律而胃肠功能下降者下
63、降者; ;还有对蛋白质抗原性过敏的过敏性体质者还有对蛋白质抗原性过敏的过敏性体质者等等) )。易消化功能肽不仅能提供丰富的必需氨基酸易消化功能肽不仅能提供丰富的必需氨基酸, ,还能促进双歧杆菌的生长繁殖还能促进双歧杆菌的生长繁殖, ,促进乳酸杆菌的生促进乳酸杆菌的生长发育长发育, ,有望在酸奶、面包、乳酪中提高营养价值有望在酸奶、面包、乳酪中提高营养价值, ,改善风味和品质。改善风味和品质。l（1 1）将陆地酶工程技术应用于海洋将陆地酶工程技术应用于海洋蛋白酶蛋白酶解活性肽解活性肽的研究的研究, ,在此基础上在此基础上, ,开发海洋蛋开发海洋蛋白资源酶解专用工程用酶。白资源酶解专用工程用酶。l
64、将陆地微生物发酵工程和酶工程技术应用将陆地微生物发酵工程和酶工程技术应用于海洋蛋白资源的综合利用研究于海洋蛋白资源的综合利用研究, ,以海洋生以海洋生物蛋白资源为原料物蛋白资源为原料, ,通过生物酶解、提取、通过生物酶解、提取、加工加工, ,可生产许多酶解陆地蛋白源和化学合可生产许多酶解陆地蛋白源和化学合成所无法生产的产品和材料成所无法生产的产品和材料, ,研制出系列天研制出系列天然、高效、新颖的生物活性肽。然、高效、新颖的生物活性肽。l（2 2）大力加强用于海洋蛋白源酶解的专用大力加强用于海洋蛋白源酶解的专用蛋白酶制剂的开发蛋白酶制剂的开发l由于陆地生态环境、淡水生态环境与海洋由于陆地生态环
65、境、淡水生态环境与海洋生态环境具有很大的差异生态环境具有很大的差异, ,海洋生物为了适海洋生物为了适应所处的特殊的生态环境应所处的特殊的生态环境, ,其氨基酸的组成其氨基酸的组成和氨基酸的序列肯定与陆地及淡水生物的和氨基酸的序列肯定与陆地及淡水生物的蛋白源具有很大的差别。目前进入工业生蛋白源具有很大的差别。目前进入工业生产的蛋白酶制剂可能没办法高效用于海洋蛋产的蛋白酶制剂可能没办法高效用于海洋蛋白源的酶解。因此白源的酶解。因此, ,应从应从海洋生物体内、海海洋生物体内、海水及海洋污泥中分离、纯化可高效酶解不水及海洋污泥中分离、纯化可高效酶解不同海洋蛋白源的高产蛋白酶的菌株同海洋蛋白源的高产蛋白酶的
66、菌株, ,对其产对其产酶动力学、酶学性质进行研究酶动力学、酶学性质进行研究, ,并对其产酶并对其产酶特性来优化。特性来优化。l如：已经成功地从1800 米的深海淤泥中分离得到产低温蛋白酶的耐冷菌,该菌体的最适生长温度在15 以下,最适产酶温度10 ,蛋白酶的最适酶活温度在35 左右。l（3 3）积极利用海洋低值鱼类及水产品废弃积极利用海洋低值鱼类及水产品废弃蛋白源进行酶解活性肽的高值化开发蛋白源进行酶解活性肽的高值化开发l 低值的小杂鱼及水产品加工的废弃物,一般占渔获物的28 % 。目前我国大多数都用在生鱼粉的生产，加工技术落后,不但产品的得率和附加值低,而且严重污染近海水域。有的水产品加工的废弃物蛋白质含量很高，运用生物技术方法将其部分转换成优质鱼浓缩蛋白和活性肽。由于海洋的特殊环境，组成海洋多肽化合物的氨基由于海洋的特殊环境，组成海洋多肽化合物的氨基酸除常见的氨基酸外，还有酸除常见的氨基酸外，还有- -氨基异丁酸氨基异丁酸等多种海等多种海洋天然产物特有的氨基酸类型，具有多种生理活性洋天然产物特有的氨基酸类型，具有多种生理活性（五）活性氨基酸牛磺酸l牛磺酸( taurine，Tau)
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